全自動WB工作站的操作步驟介紹

　　免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（Western blotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。結合化學發光檢測，可以同時比較多個樣品同種蛋白的表達量差異。

　　由于抗體僅與目標蛋白質結合，因此一般只能看到一條清晰的帶，條帶的粗細對應于蛋白質量。通過分析特定反應的位置和強度，可以獲得目標蛋白在給定細胞或組織勻漿中的表達信息。由于凝膠電泳的高分辨率和免疫的強特異性和高靈敏度，Western印跡分析可檢測低至1ng的靶蛋白。該方法廣泛應用于分子生物學、生物化學、免疫遺傳學等分子生物學領域。

　　全自動WB工作站操作步驟：

　　1.準備樣品

　　1）制冰，準備冰盒。

　　2）配制細胞裂解液：根據細胞數量確定所需裂解液：50ul/六孔板一孔。

　　裂解液配方：100ul碧云天裂解液+1ul蛋白酶抑制劑混合物+1ul PMSF

　　3）按實驗需要準備好細胞：去掉培養基，1×PBS洗3次（去掉培養基中的血清），每個孔（6孔板）加入適量的裂解液。迅速用細胞刮刮下細胞并轉移至1.5ml管中，置于冰上20min，振蕩混合后，再置冰上10min。

　　4）12，000g，4℃離心15min，收集上清至另一1.5ml管。

　　5）取2.5ul樣品加22.5ul三蒸水稀釋，用于BCA法測蛋白濃度。

　　6）其余樣品加5×Loading Buffer（按2.5mlBuffer/10ml蛋白）用95℃煮10分鐘，期間振蕩一次。

　　7）直接上樣跑膠或者分裝-80°C長期保存。