蛋白印跡儀的使用規(guī)范與注意事項

　　蛋白印跡儀(Western Blot System)是一種用于檢測和分析特定蛋白質(zhì)的實驗設備。其原理包括聚丙烯酰胺凝膠電泳(分離蛋白質(zhì))、轉(zhuǎn)膜(將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體，如NC膜或PVDF膜)、抗體孵育(特異性抗體與目標蛋白結(jié)合)、顯色反應(標記的二抗與底物反應，顯示目標蛋白)。
 

　　蛋白印跡儀廣泛應用于生物醫(yī)學研究(如蛋白質(zhì)表達分析、細胞信號通路研究)、臨床診斷(如HIV感染確認、自身免疫性疾病檢測)、藥物研發(fā)(如生物標志物發(fā)現(xiàn)、蛋白質(zhì)相互作用研究)等領域。其優(yōu)勢在于高靈敏度和特異性，能夠定量和定性分析蛋白質(zhì)。
 

　　使用規(guī)范與注意事項：
 

　　1、實驗準備：
 

　　樣本需充分裂解，定量后上樣(避免過載導致條帶模糊)。
 

　　預制膠需平衡至室溫，避免冷凝水影響電泳。
 

　　2、轉(zhuǎn)膜優(yōu)化：
 

　　PVDF膜需甲醇激活，NC膜需緩沖液浸潤。
 

　　轉(zhuǎn)膜時間根據(jù)蛋白分子量調(diào)整(如100kDa蛋白需1.5小時)。
 

　　3、抗體孵育：
 

　　一抗?jié)舛刃桀A實驗確定，4℃過夜孵育效果佳。
 

　　二抗需避光保存，現(xiàn)用現(xiàn)配。
 

　　4、設備維護：
 

　　定期清潔電泳槽和轉(zhuǎn)印電極，防止蛋白殘留。
 

　　校準成像系統(tǒng)的光強和曝光時間，確保定量準確性。